WESTERN BLOT

 

Un metodo utilizzato per verificare la presenza di una proteina specifica in una miscela complessa quello di eseguire un western blot, con un anticorpo specifico diretto contro un dominio della proteina o una sequenza segnale (tag) inserita nella proteina.

Si procede preparando un estratto proteico dalle cellule; da questa miscela viene separata la proteina di interesse mediante elettroforesi in Gel di SDS-poliacrilammide. Dopo la corsa su gel le proteine vengono trasferite dal Gel ad una membrana di nitrocellulosa, che viene incubata con una soluzione di un anticorpo specifico per la proteina di interesse. La membrana viene poi incubata con una soluzione contenente un anticorpo legato ad un enzima per rivelare la proteina.

Come sistema di rivelazione viene seguito un metodo colorimetrico che permette di visualizzare la proteina direttamente sulla nitrocellulosa.

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